ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研實(shí)驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用,然而科研新手們面對各種各樣、動則上千種的ELISA試劑盒,內(nèi)心應(yīng)該是崩潰的。各種廠家、品牌,各種種屬,各種參數(shù),琳瑯滿目,質(zhì)量良莠不齊,如何浪里淘金,選擇既符合研究需求,又品質(zhì)上乘的 ELISA 試劑盒呢?今天教教大家如何正確找到合適的ELISA試劑盒。
1.要明確樣本類型
不同廠家驗(yàn)證樣本類型不同,即使同一廠家不同試劑盒,其驗(yàn)證樣本類型也不盡相同。特別是復(fù)雜的血漿樣本,根據(jù)樣本處理方式的差異,分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿,因此購買前需仔細(xì)核對。
2.要會預(yù)測自己的目標(biāo)因子的濃度
一般來說,待測因子可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或資料獲得參考的檢測范圍,且正常人與疾病狀態(tài)存在差異。如熱門炎癥因子 IL-6,正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL,病人會顯著增高,CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。因而,必要時進(jìn)行樣本的稀釋及選擇合適檢測范圍的試劑盒極其重要。若濃度太低,可選擇高敏試劑盒;若不確定待測濃度或樣本間濃度差異較大,建議使用檢測動態(tài)范圍更寬的化學(xué)發(fā)光法ELISA試劑盒。如同樣為 IL-6 ELISA 試劑盒,各類型檢測范圍差異較大,需要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的試劑盒。
3.檢查試劑盒進(jìn)行過哪些質(zhì)控
質(zhì)控數(shù)據(jù)在說明書中即可找到,在購買前檢查試劑盒是否進(jìn)行過嚴(yán)格的質(zhì)控實(shí)驗(yàn),包括批次內(nèi)(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實(shí)驗(yàn)、線性稀釋實(shí)驗(yàn)及交叉反應(yīng)測試等,每個數(shù)據(jù)好都看一下,確保的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。
4.確定需檢測的因子數(shù)量
如果待測因子超過 5 個,且樣本量較小時,單因子 ELISA 檢測方法并不是。建議考慮多因子檢測方法,如固相芯片(樣本數(shù)量一般 5 個以內(nèi),檢測指標(biāo)可達(dá)上百個)及 Luminex 液相芯片方法(檢測樣本多達(dá) 80 個,檢測指標(biāo)多達(dá) 50 個)或微流控 ELISA 檢測系統(tǒng) Ella。可節(jié)約樣本及時間成本,也可保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確。
5.預(yù)算評估
預(yù)算往往是大家優(yōu)先考慮的,實(shí)際上,不能夠一味講究產(chǎn)品價格,更需要考慮性價比。生物學(xué)是極其嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué),一致性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是基金、文章等評審過程中的因素,即使低廉的價格,不能夠重現(xiàn)結(jié)果,也是資源的另一種浪費(fèi)。
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